Pesquisadores da China recentemente geraram a cepa PEDV recombinante com uma deleção de 7 aminoácidos na proteína E, para projetar uma vacina PEDV atenuada ao vivo.
As vacinas comerciais disponíveis agaistas PEDV não conseguiram proteger totalmente contra as cepas epidêmicas. A proteína do envelope PEDV (proteína E) afeta o ciclo viral e a virulência e contribui para o desenvolvimento da diarréia em leitões. Portanto, modificar genes virulentos pode ajudar a desenvolver vacinas PEDV vivas seguras e eficazes.
Coleta de dados
Os pesquisadores isolaram a cepa CH/SX/2015 do PEDV. Eles também construíram 2 cepas recombinantes (rCH/SX/2015 e rCH/SX/2016-SHNXP). A equipe também construiu a cepa recombinante rPEDV-E?aa23–a29, usando a cepa rCH/SX/2016-SHNXP como a espinha dorsal. Eles fizeram isso para explorar o efeito da deleção de aminoácidos nas posições 23-29 da proteína E no comportamento viral.
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Eles detectaram o efeito da mutação Ea23-aa29 sobre o comportamento viral em células MARC145 e células epiteliais do rim 1 do rim de células-porcinas de Lilly Laboratories. A equipe realizou o ensaio de PqPCR em tempo real para medir as cópias de RNA genômicas. Eles dividiram aleatoriamente 10 leitões em 3 grupos. Esses leitões foram negativos para o vírus da gastroenterite transmissível, PEDV, coronavírus delta porcina e rotavírus. Aos 2 dias de idade, inocularam oralmente os leitões com uma dose de rCH/SX/2015 ou rCH/SX/2016-SHNXP, ou zombam deles inoculados com o Medium Modificado da Dulbecco.
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A equipe dividiu aleatoriamente 21 leitões em 3 grupos. Esses leitões foram negativos para o vírus da gastroenterite transmissível, PEDV, coronavírus delta porcina e rotavírus. Os leitões inoculados por via oral da equipe no grupo de desafio com cepas rCH/SX/2016-SHNXP (parental) e rPEDV-Eaa23–aa29 (recombinante). Eles inocularam o grupo de controle negativo com um volume igual de Águia Modificada de Dulbecco.
Os pesquisadores monitoraram os leitões em busca de sinais clínicos de doença e ganho de peso. Eles coletaram swabs retais para determinar cópias de derramamento de RNA viral e os níveis de interferon-o. Além disso, eles pontuaram a gravidade da diarreia como: 0 ? sólido; 1o pastoso; 2 ? semiliquid (diarregenia leve); e 3 ? líquido (diarreia grave). A equipe coletou amostras de sangue e detectou o soro anti-PEDV N IgG. Por fim, eles eutanásiam 4 leitões e tecidos fixos para exame histopatológico.
Virulência de rCH/SX/2015 vs. rCH/SX/2016-SXT
Leitões desafiados com rCH/SX/2016-SHNXP apresentaram taxa de diarreia de 100%, perda de peso e paredes intestinais finas e transparentes em exame post-mortem. Todos morreram em dois dias após a inoculação. Por outro lado, todos os leitões desafiados com rCH/SX/2015 não apresentaram sinais de diarreia sem mortalidade e perda de peso. Eles tinham uma parede intestinal normal no exame post-mortem. Esses resultados sugerem que o rCH/SX/2015 é menos virulento do que a cepa rCH/SX/2016-SHNXP.
Características de estirpe recombinante
A cepa recombinante criou tamanhos menores de efeito citopático e placas do que a cepa parental. A cepa recombinante exibiu um titer infeccioso significativamente menor em qualquer momento. Ambas as cepas parentais e recombinantes exibiram níveis de expressão comparáveis de RNA genômico. Isto sugeriu que a mutação pode não afetar a replicação do PEDV. As proporções de títulos de estirpe recombinantes entre os sobrenadantes e os lisados celulares reduziram cerca de 5 vezes em comparação com a cepa parental. Isso indicou uma diminuição significativa na liberação viral e na infectividade da estirpe recombinante.
Impacto da tensão recombinante na imunidade e no intestino
A estirpe recombinante induziu níveis de expressão mais elevados de interferão, interferon-‘1 e interferon- 3 do que a cepa parental. O nível de RNA genômico da cepa recombinante foi menor que a cepa parental. Leitões inoculados com a cepa recombinante apresentaram maiores níveis de anti-PEDV N IgG do que os leitões no grupo simulado. Isso sugeriu que a cepa recombinante poderia fornecer proteção contra o desafio do PEDV virulento. Leitões inoculados com a cepa recombinante apresentaram menor queda de RNA fecal viral. A cepa recombinante fez com que as lesões mais leves entrassem vilosidades em comparação com os danos vilosídicos do intestino parental, mas mais graves, do que o grupo simulado.
Conclusões sobre as conclusões
Os autores concluíram que a proteína PEDV E é um fator de virulência. Além disso, a cepa recombinante induz respostas de interferon mais fortes, causa lesões intestinais mais leves e tem menos liberação viral e menor infecciosidade do que o vírus parental; no entanto, retém a imunogenicidade viral em leitões.
